Caracterización fenotípica de células madre mesenquimales humanas de médula ósea y tejido adiposo. Resultados preliminares / Phenotypic characterization of mesenchymal human stem cell from bone marrow and adipose tissue. preliminary results

Introducción:las células madre mesenquimales (CMM) poseen características fenotípicas y funcionales que les confieren un amplio potencial terapéutico por su posible uso en la terapia celular regenerativa, en el rechazo del trasplante alogénico y en enfermedades inflamatorias crónicas. Objetivo: evaluar la expresión de moléculas de membrana que permiten identificar la expresión de patrones moleculares característicos de CMM humanas mantenidas en cultivo. Métodos: se estudió la expresión fenotípica de células mononucleares procedentes de médula ósea obtenidas mediante aspiración medular, separadas por gradiente de Ficoll y cultivadas ex vivo entre los pases o subcultivos 3 y 16; y adipocitos cultivados procedentes de la extracción enzimática de tejido adiposo de donantes sanos. Se realizó doble marcaje para las moléculas CD34/CD45, CD34/CD90, CD34/CD117, y CD34/CD44. Resultados: en los resultados preliminares obtenidos se observó que las células cultivadas procedentes de médula ósea, entre los pases 4 y 8 de cultivo expresaron 45,13 por ciento de células CD34-/CD45- (doblemente negativas), lo que correspondió con el 25,24 por ciento de células CD34-/CD90+ y el 96,90 por ciento de CD34-/CD117-. En las células procedentes de cultivo de adipocitos se observó el 52,3 por ciento de CD34-/CD45- (doblemente negativas),12,31 por ciento de CD34-/CD90+,43,31 por ciento de CD34-/CD117- y 64,68 por ciento de CD34-/CD44+.Estos resultados sugieren que ambos cultivos se diferenciaron a CMM. Las CMM procedentes de adipocitos mostraron el 64,68 por ciento de células con expresión de la molécula de adhesión CD44 a la que se atribuyen propiedades funcionalescomo el asentamiento tisular. Conclusiones: estos resultados preliminares permiten corroborar que ambos métodos experimentales de cultivo son efectivos para la obtención de CMM con fines terapéuticos(AU)

Introduction:mesenchymal stem cells (MSCs) have phenotypic and functional characteristics whichgives them a broad therapeutic potential for possible use in regenerative cell therapy, allogeneic transplant rejection and chronic inflammatory diseases. Objective: to evaluate the expression of moleculemembranes expression to identify molecular patterns characteristic of human MSCs maintained in culture. Methods:the phenotypic expression of mononuclear cells from bone marrow wereobtained by bone marrow aspiration, separated by Ficoll and cultured ex vivo between passages or subcultures 3 and 16 and adipocytes cultured obtained from enzyme extraction of adipose tissue of healthy donor. Double staining was performed for molecules CD34/CD45, CD34/CD90, CD34/CD117 and CD34/CD44. Results:preliminary results showed that cultured mononuclear cells from bone marrow between passage 4 and 8 of culture expressed 45,13 percent CD34-/CD45- cells (double-negative), corresponding to 25,24 percent CD34-/CD90+ cells and 96,90 percent of CD34-/CD117-. Adipocytes from culture cells showed 52,3 percent CD34-/CD45- (double-negative), 12,31 percent cells CD34-/CD90+, 43,31 percent CD34-/CD117- (double-negative). Our results suggest that both cultures were differentiated to MSCs. Adipocytes from MSCs showed 64,68 percent of cells with expression of CD44 adhesion molecule conferring functional homing properties Conclusions:these preliminary results corroborate that the experimental methods used in cultivation are effective for obtaining MSCs with therapeutic purposes(AU)

Caracterización fenotípica de células madre mesenquimales humanas de médula ósea y tejido adiposo. Resultados preliminares / Phenotypic characterization of mesenchymal human stem cell from bone marrow and adipose tissue. preliminary results

Introducción:las células madre mesenquimales (CMM) poseen características fenotípicas y funcionales que les confieren un amplio potencial terapéutico por su posible uso en la terapia celular regenerativa, en el rechazo del trasplante alogénico y en enfermedades inflamatorias crónicas. Objetivo: evaluar la expresión de moléculas de membrana que permiten identificar la expresión de patrones moleculares característicos de CMM humanas mantenidas en cultivo. Métodos: se estudió la expresión fenotípica de células mononucleares procedentes de médula ósea obtenidas mediante aspiración medular, separadas por gradiente de Ficoll y cultivadas ex vivo entre los pases o subcultivos 3 y 16; y adipocitos cultivados procedentes de la extracción enzimática de tejido adiposo de donantes sanos. Se realizó doble marcaje para las moléculas CD34/CD45, CD34/CD90, CD34/CD117, y CD34/CD44. Resultados: en los resultados preliminares obtenidos se observó que las células cultivadas procedentes de médula ósea, entre los pases 4 y 8 de cultivo expresaron 45,13 por ciento de células CD34-/CD45- (doblemente negativas), lo que correspondió con el 25,24 por ciento de células CD34-/CD90+ y el 96,90 por ciento de CD34-/CD117-. En las células procedentes de cultivo de adipocitos se observó el 52,3 por ciento de CD34-/CD45- (doblemente negativas),12,31 por ciento de CD34-/CD90+,43,31 por ciento de CD34-/CD117- y 64,68 por ciento de CD34-/CD44+.Estos resultados sugieren que ambos cultivos se diferenciaron a CMM. Las CMM procedentes de adipocitos mostraron el 64,68 por ciento de células con expresión de la molécula de adhesión CD44 a la que se atribuyen propiedades funcionalescomo el asentamiento tisular. Conclusiones: estos resultados preliminares permiten corroborar que ambos métodos experimentales de cultivo son efectivos para la obtención de CMM con fines terapéuticos

Introduction:mesenchymal stem cells (MSCs) have phenotypic and functional characteristics whichgives them a broad therapeutic potential for possible use in regenerative cell therapy, allogeneic transplant rejection and chronic inflammatory diseases. Objective: to evaluate the expression of moleculemembranes expression to identify molecular patterns characteristic of human MSCs maintained in culture. Methods:the phenotypic expression of mononuclear cells from bone marrow wereobtained by bone marrow aspiration, separated by Ficoll and cultured ex vivo between passages or subcultures 3 and 16 and adipocytes cultured obtained from enzyme extraction of adipose tissue of healthy donor. Double staining was performed for molecules CD34/CD45, CD34/CD90, CD34/CD117 and CD34/CD44. Results:preliminary results showed that cultured mononuclear cells from bone marrow between passage 4 and 8 of culture expressed 45,13 percent CD34-/CD45- cells (double-negative), corresponding to 25,24 percent CD34-/CD90+ cells and 96,90 percent of CD34-/CD117-. Adipocytes from culture cells showed 52,3 percent CD34-/CD45- (double-negative), 12,31 percent cells CD34-/CD90+, 43,31 percent CD34-/CD117- (double-negative). Our results suggest that both cultures were differentiated to MSCs. Adipocytes from MSCs showed 64,68 percent of cells with expression of CD44 adhesion molecule conferring functional homing properties Conclusions:these preliminary results corroborate that the experimental methods used in cultivation are effective for obtaining MSCs with therapeutic purposes

El tejido adiposo como fuente alternativa en la medicina regenerativa / Adipose tissue as an alternative source for regenerative medicine

El tejido adiposo constituye una fuente alternativa en la terapia celular debido a diferentes factores como su fácil extracción, su alto contenido de células madre mesenquimales y la capacidad de su expansión ex vivo que puede ser equivalente o hasta superior a las células obtenidas de la médula ósea en términos de su habilidad de diferenciación, potencial de angiogénesis y sus efectos inmunomoduladores en la inflamación. Estas células presentan el siguiente perfil de expresión: marcaje positivo para CD29, CD44, CD54, CD90, CD105 y HLA clase I y negativas para CD45, CD116, CD14, CD31 y HLA-II. En la actualidad existen evidencias que las células madre derivadas de tejido adiposo tienen el potencial de diferenciarse, además, a células de origen no mesodérmico como: neuronas, células pancreáticas, endocrinas, hepatocitos, cardiomiocitos y células epiteliales, entre otras. Debido a todos estos factores y a la ausencia de problemas éticos e inmunológicos, sugieren una nueva posibilidad en el tratamiento de muchas enfermedades comunes a la práctica médica cotidiana

Adipose tissue is an alternative source in cell therapy due to various factors such as its easy extraction, its high content of mesenchymal stem cells and their capacity of ex vivo expansion which can be equivalent or even superior to cells obtained from bone marrow in terms of its ability of differentiation potential of angiogenesis and its immunomodulatory effects in inflammation. These cells have the following expression profile: positive staining for CD29, CD44, CD54, CD90, CD105 and HLA-I; and negative for CD45, CD116, CD14, CD31 and HLA-II. At present, there is evidence that the stem cells derived from adipose tissue has have the potential to differentiate in addition to cells of mesodermal origin as neurons, pancreatic cells, endocrine, hepatocytes, cardiomyocytes and epithelial cells, among others. Because of All these factors and the absence of ethical and immunological problems suggest a new possibility in the treatment of many diseases common to everyday medical practice

El tejido adiposo como fuente alternativa en la medicina regenerativa / Adipose tissue as an alternative source for regenerative medicine

El tejido adiposo constituye una fuente alternativa en la terapia celular debido a diferentes factores como su fácil extracción, su alto contenido de células madre mesenquimales y la capacidad de su expansión ex vivo que puede ser equivalente o hasta superior a las células obtenidas de la médula ósea en términos de su habilidad de diferenciación, potencial de angiogénesis y sus efectos inmunomoduladores en la inflamación. Estas células presentan el siguiente perfil de expresión: marcaje positivo para CD29, CD44, CD54, CD90, CD105 y HLA clase I y negativas para CD45, CD116, CD14, CD31 y HLA-II. En la actualidad existen evidencias que las células madre derivadas de tejido adiposo tienen el potencial de diferenciarse, además, a células de origen no mesodérmico como: neuronas, células pancreáticas, endocrinas, hepatocitos, cardiomiocitos y células epiteliales, entre otras. Debido a todos estos factores y a la ausencia de problemas éticos e inmunológicos, sugieren una nueva posibilidad en el tratamiento de muchas enfermedades comunes a la práctica médica cotidiana(AU)

Adipose tissue is an alternative source in cell therapy due to various factors such as its easy extraction, its high content of mesenchymal stem cells and their capacity of ex vivo expansion which can be equivalent or even superior to cells obtained from bone marrow in terms of its ability of differentiation potential of angiogenesis and its immunomodulatory effects in inflammation. These cells have the following expression profile: positive staining for CD29, CD44, CD54, CD90, CD105 and HLA-I; and negative for CD45, CD116, CD14, CD31 and HLA-II. At present, there is evidence that the stem cells derived from adipose tissue has have the potential to differentiate in addition to cells of mesodermal origin as neurons, pancreatic cells, endocrine, hepatocytes, cardiomyocytes and epithelial cells, among others. Because of All these factors and the absence of ethical and immunological problems suggest a new possibility in the treatment of many diseases common to everyday medical practice(AU)

Células madre mesenquimales: aspectos relevantes y aplicación clínica en la medicina regenerativa / Mesenchymal stem cells: relevant aspects and clinical applications in regenerative medicine

Se describen los aspectos más relevantes de las células madre mesenquimales que incluyen su plasticidad hacia diversos linajes celulares, como condrocitos, osteocitos y adipositos, entre otros. Dichas células se pueden obtener principalmente de médula ósea, sangre de cordón umbilical y tejido adiposo, de donde se han logrado establecer cultivos que permiten estudiar sus propiedades funcionales y fenotípicas. Estas expresan antígenos CD73, CD90 y CD105 en ausencia de antígenos hematopoyéticos CD34 y CD45, así como diferentes receptores para citocinas y moléculas de adhesión. Futuras investigaciones permitirán conocer diversos aspectos biológicos de estas células, de importancia en su utilización en la medicina regenerativa como medida terapéutica para solucionar una amplia variedad de enfermedades(AU)

The main features of multipotent mesenchymal stem cells are described, which includes its plasticity to various cell lineages such as chondrocytes, osteocytes and adipocytes, among others. These cells can be obtained mainly from bone marrow, umbilical cord blood and adipose tissue, where it has been possible to establish crops that allow the study of their functional and phenotypic properties. They express antigens CD73, CD 90 and CD105 in the absence of CD34 and CD45 hematopoietic antigens, as well as cytokine receptors and adhesion molecules. Future investigations will make it possible to know various biological aspects of these cells of importance for their use in regenerative medicine as a therapeutic mean to solve a wide variety of diseases(AU)

Células madre mesenquimales: aspectos relevantes y aplicación clínica en la medicina regenerativa / Mesenchymal stem cells: relevant aspects and clinical applications in regenerative medicine

Se describen los aspectos más relevantes de las células madre mesenquimales que incluyen su plasticidad hacia diversos linajes celulares, como condrocitos, osteocitos y adipositos, entre otros. Dichas células se pueden obtener principalmente de médula ósea, sangre de cordón umbilical y tejido adiposo, de donde se han logrado establecer cultivos que permiten estudiar sus propiedades funcionales y fenotípicas. Estas expresan antígenos CD73, CD90 y CD105 en ausencia de antígenos hematopoyéticos CD34 y CD45, así como diferentes receptores para citocinas y moléculas de adhesión. Futuras investigaciones permitirán conocer diversos aspectos biológicos de estas células, de importancia en su utilización en la medicina regenerativa como medida terapéutica para solucionar una amplia variedad de enfermedades

The main features of multipotent mesenchymal stem cells are described, which includes its plasticity to various cell lineages such as chondrocytes, osteocytes and adipocytes, among others. These cells can be obtained mainly from bone marrow, umbilical cord blood and adipose tissue, where it has been possible to establish crops that allow the study of their functional and phenotypic properties. They express antigens CD73, CD 90 and CD105 in the absence of CD34 and CD45 hematopoietic antigens, as well as cytokine receptors and adhesion molecules. Future investigations will make it possible to know various biological aspects of these cells of importance for their use in regenerative medicine as a therapeutic mean to solve a wide variety of diseases

Cultivo de células estromales de rata. Influencia del suero fetal bovino / Stromal rat cell culture. Influence of fetal calf serum

Las células madre estromales humanas y de roedores cultivadas pueden ser inducidas a diferenciarse en neuronas, enfatizando su utilidad potencial en la terapia celular neurorrestaurativa. Los sistemas de cultivo para la expansión de estas células describen el uso de diferentes proporciones de suero fetal, lo que motivó a estudiar qué concentración de suero fetal bovino era capaz de garantizar un adecuado rendimiento celular. Las células de la médula ósea de rata se cultivaron en medio a-MEM suplementado con 10 y 20 por cientode suero fetal bovino y se subcultivaron hasta 3 veces. La viabilidad celular de los cultivos primarios y los subcultivos estuvo por encima del 98 por ciento en ambos experimentos. Los cultivos primarios demoraron 17,4 días en confluir y los subcultivos 7,7 días. La concentración de suero fetal al 20 por ciento no aumentó significativamente la velocidad de multiplicación celular; no obstante, se obtuvo un mayor número de células estromales. El sistema de expansión in vitro podría utilizarse en estudios futuros para la expansión de las células estromales humanas, lo que sienta mejores bases para su aplicación clínica

Cultured human and rodents stromal stem cells can be induced to differentiate into neurons, emphasizing its potential use in neurorestorative cell therapy. Cropping systems for the expansion of these cells describe the use of different ratios of fetal serum, which led to study what concentration of fetal calf serum was able to ensure an adequate cell yield. Cells from rat bone marrow were cultured in medium supplemented with a-MEM 10 and 20 percent fetal bovine serum and subcultured up to 3 times. Cell viability of primary cultures and subcultures was above 98 percent in both experiments. Primary cultures converge delayed in 17.4 days and 7.7 days subcultures. The concentration of 20 percent fetal calf serum did not significantly increase the speed of cell division, however, we obtained a greater number of stromal cells. The expansion in vitro system could be used in future studies for the expansion of human stromal cells, which feels better basis for clinical application

Cultivo de células estromales de rata. Influencia del suero fetal bovino / Stromal rat cell culture. Influence of fetal calf serum

Las células madre estromales humanas y de roedores cultivadas pueden ser inducidas a diferenciarse en neuronas, enfatizando su utilidad potencial en la terapia celular neurorrestaurativa. Los sistemas de cultivo para la expansión de estas células describen el uso de diferentes proporciones de suero fetal, lo que motivó a estudiar qué concentración de suero fetal bovino era capaz de garantizar un adecuado rendimiento celular. Las células de la médula ósea de rata se cultivaron en medio a-MEM suplementado con 10 y 20 por cientode suero fetal bovino y se subcultivaron hasta 3 veces. La viabilidad celular de los cultivos primarios y los subcultivos estuvo por encima del 98 por ciento en ambos experimentos. Los cultivos primarios demoraron 17,4 días en confluir y los subcultivos 7,7 días. La concentración de suero fetal al 20 por ciento no aumentó significativamente la velocidad de multiplicación celular; no obstante, se obtuvo un mayor número de células estromales. El sistema de expansión in vitro podría utilizarse en estudios futuros para la expansión de las células estromales humanas, lo que sienta mejores bases para su aplicación clínica(AU)

Cultured human and rodents stromal stem cells can be induced to differentiate into neurons, emphasizing its potential use in neurorestorative cell therapy. Cropping systems for the expansion of these cells describe the use of different ratios of fetal serum, which led to study what concentration of fetal calf serum was able to ensure an adequate cell yield. Cells from rat bone marrow were cultured in medium supplemented with a-MEM 10 and 20 percent fetal bovine serum and subcultured up to 3 times. Cell viability of primary cultures and subcultures was above 98 percent in both experiments. Primary cultures converge delayed in 17.4 days and 7.7 days subcultures. The concentration of 20 percent fetal calf serum did not significantly increase the speed of cell division, however, we obtained a greater number of stromal cells. The expansion in vitro system could be used in future studies for the expansion of human stromal cells, which feels better basis for clinical application(AU)

Autologous bone marrow stem cell neurotransplantation in stroke patients. An open study.

PURPOSE: Bone marrow stem cells (BMSC) were transplanted into the perilesional area in five patients bearing sequels of stroke, to evaluate the safety of the procedure and tolerance to the transplanted cells. METHODS: Cells were obtained from bone marrow samples taken from the same patient and stereotactically implanted into the targets, determined using a combination of images, and trans-operative recording of multiunit activity. The cells were implanted in several points along tracts in the perilesional region. RESULTS: No important adverse events derived from surgery or transplant were observed during the one year follow-up period, or detected using a combination of tests and functional measurements applied pre- and post-surgically. In contrast, some improvements were observed regarding the neurological condition of the patients, but the small number of patients in the study does not allow any conclusive statement. CONCLUSIONS: Our results demonstrate that BMSC can be safely transplanted into the brain of patients, with excellent tolerance and without complications, using the methods described here.